组氨酸标签蛋白纯化
女 | 38岁
2018-10-17
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问题描述：我要表达的蛋白序列需要加一个组氨酸标签,方便后面的分离纯化,我该怎么加?分离纯化后对标签进行切割常用的酶切位点又是怎么样的呢?
回答
组氨酸标签是一种融合标签,它可与多种蛋白形成融合蛋白,基于组氨酸的咪唑环与金属离子（如镍离子）起化学作用而生成螯合的原理,可以利用标签纯化融合蛋白,抗体具有高灵敏度,高特异性和高亲和力,随着生物技术的发展,科研人员可以通过DNA重组技术,构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白,进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化,以达到研究的需求
我目前的经验来看多数的都设计有蛋白酶切位点,而段的都直接加入终止密码子不要了,标签也无需自己加,你可以选择两端都带标签的,上游使用就不会在段有标签了,下游引物不要加终止密码子,同时引入蛋白酶切点,什么酶看你自己选择了,有4度切的就不错,都行,酶切的也多少有些差别,自己选择吧,
