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注意事项1．不规则的沉淀线可能是加样过满溢出、孔型不规则、边缘开裂、孔底渗漏、孵育时没放水平、扩散时琼脂变干燥、温度过高蛋白质变性或未加防腐剂导致细菌污染等所致,2．抗原抗体的比例与沉淀带的位置、清晰度有关,如抗原过多,沉淀带向抗体孔偏移和增厚,反之亦然,可用不同稀释度的反应液试验后调节,
材料与试剂1．琼脂粉2．平皿3．打孔器4．生理盐水或其他缓冲液,可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐,操作方法1．称取一定量的琼脂粉,按1%左右（0.8％～1.5%）的比例加入生理盐水或缓冲液,水浴煮沸融化20min,2．将融化的琼脂倒入平皿内,使厚度2mm～3mm,自然冷却,3．根据要求（孔径即孔的直径,孔距即两孔圆心之间的距离,包括两孔的半径）按模板打孔,也可直接用组合打孔器打孔,现在一般多打成梅花形孔图,4．挑出孔内琼脂,注意不要挑破孔缘,5．在火焰上缓缓加热,使孔底边缘的琼脂少许熔化,以封底,以免加样后液体从孔底渗漏,6．以毛细滴管吸取样品加入孔内,注意不要产生气泡,以加满为度,加少了,影响反应程度,加多了,易溢出,也影响反应结果,7．加毕后,盖上平皿盖,将平皿翻过来,置湿盘中,37℃自由扩散24h～48h,
